差速離心法

    差速離心法指分步改變離心轉(zhuǎn)速或向速崎低速離心交替進(jìn)行，選用大小不向的離心力使具備不同質(zhì)量、不同沉降系數(shù)的微小顆粒(粒子或大分子)從混合的懸浮液中分批沉降而進(jìn)行分離的力法。該方法適用于在懸浮液中的樣品顆粒之間重量存在較大差別，更準(zhǔn)確地說是沉降系數(shù)的差別在一個到幾個數(shù)量級的混合樣品的分離。重量或S值的差別越大，分離的效果越好。對于差別較小的顆粒，差速離心法就很難得到滿意的分離效果。這種離心方法是通過得到沉淀或得到除去大的顆粒后的上清液來進(jìn)行分離、提取。該方法又稱差速沉淀法。
    差速沉淀離心一般采用角轉(zhuǎn)子。在離心開始時，所有顆粒都均勻地分布在整個離心管中，離心期間各種顆粒以不問速度向管底沉降，纖過一定時間，重的或S值大的顧粒全部沉別管底，得到不合這種顆粒的上清液。將上清液進(jìn)一步以更高轉(zhuǎn)速離心一定時間，又對得到次輕的顆粒，逐漸增加離心轉(zhuǎn)速就可以分步得到不同質(zhì)量、不同S值的顆粒樣品，達(dá)到分離的目的。
    但是每次得到的沉淀并不均一，這是由于各種大小和密度的顆粒的離心管中均勻分布，經(jīng)一定時間離心后全部重的顆粘達(dá)到管底時，離心開始時離管底較近處的較輕顆粒也沉到管底而混于該重顆粒之中，所以還要將沉淀再懸浮，以原來的轉(zhuǎn)速再次離心，獲得的沉淀將更加“純”一些，這樣反復(fù)幾次就可以得到基本上大小均一的“純”樣品。這個過程稱為“洗”沉淀。將每次洗過的上清液合并起來以更向轉(zhuǎn)速離心，從上清液或沉淀得到分離提純的另一組分。
    差速離心常用來分離各種化細(xì)胞器從粗提、蛋白質(zhì)。例如組織勾漿可根據(jù)它們的S值大小與具他組分提山來。這種方法將初的沉淀反復(fù)地懸浮和離心2—3次就能得到一個相對純的亞細(xì)腦組分，但得到的糾分也不是均一，可以進(jìn)一步用一種連續(xù)的液體密度梯度代替均勻的懸浮介質(zhì)，從而得到一個更好的分離。

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