細(xì)胞核的分離

   研究細(xì)胞核及其組成成分，如染色質(zhì)、DNA、核內(nèi)小RNA以及各種復(fù)制和轉(zhuǎn)錄酶等，需分離制備細(xì)胞核。
    真核細(xì)胞的細(xì)胞核為有膜細(xì)胞器，所分離的細(xì)胞核要保持核膜的完整性，核內(nèi)成分不外漏，核外細(xì)胞質(zhì)成分不內(nèi)滲或敖附在核膜上。通常用于分離細(xì)胞核的方法有3種，即有機(jī)溶劑法、蔗糖法和檸檬酸法。有機(jī)溶劑能阻止細(xì)胞質(zhì)的某些成分進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)，但不能保持細(xì)胞核的正常形態(tài)，且可導(dǎo)致核內(nèi)一些酶的失活，常用于定量分析細(xì)胞核的生化成分及其他一些特殊目的。蔗糖高速離心法較簡(jiǎn)單，適用面廣，核純度高，保持生物活性，但要用高速離心機(jī)和較大量的蔗糖。檸檬酸法屬差速離心法，只需低速離心機(jī)，細(xì)胞質(zhì)成分污染程度低，核破碎率也較低，蔗糖用雖較小，應(yīng)用廣泛。
    一、蔗糖高速離心法
    將組織勻漿中細(xì)胞核游離出來(lái)，再經(jīng)過(guò)蔗糖密度梯度離心，將細(xì)胞核沉淀下來(lái)。蔗糖為低滲透壓介質(zhì)，能防止細(xì)胞核自溶。在梯度液中含有Ca2+，能減少細(xì)胞核的脆性。
    二、檸檬酸低速離心法
    取組織在一定濃度的檸檬酸溶液中勻漿，通過(guò)差速離心將沉降系數(shù)較大的細(xì)胞核先沉淀下來(lái)。檸檬酸能除去紉胞質(zhì)里的酸溶性蛋白，整合二價(jià)陽(yáng)離子，抑制酶，減少校的破碎。

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